Instalaciones e Instrumentación

 CAMPUS DE CIENCIAS DE LA SALUD (Edif. LAIB)  laib

 

CAMPUS DE ESPINARDO (Edificio SACE): 

Las instalaciones de la Sección de Cultivo de Tejidos están certificadas como Laboratorios de Nivel de Bioseguridad 2. La certificación es una actividad sostenida de garantía de la calidad y la seguridad que debe efectuarse con carácter periódico  y que implica no solo las características de las instalaciones, sino también un código de prácticas y procedimientos que deben comprometerse a cumplir quienes trabajen en los laboratorios certificados.

La Sección de Cultivo de Tejidos consta de los siguientes laboratorios:

Estas instalaciones se complementan con:

B) INSTRUMENTACIÓN :

Cabinas de flujo laminar y seguridad biológica

Cabinas de seguridad biológica, clase II  (“GELAIRE” mod. BSB-4, “Cultair” mod. ASB II y “Telstar” mod. Bio IIA )  (7 puestos de trabajo)

Cabina de seguridad biológica y química “Telstar”  mod. Cytostar

Cabina de aspiración de gasesProvista de filtro adecuado para la manipulación de disolventes orgánicos y ácidos

El equipamiento de estas cabinas se completa con mecheros para cabina, pipeteadores automáticos con y sin cable, esterilizadores de material metálico por calor seco con bolas de vidrio (K-MIDT HBS 920), bombas de aspiración, etc.

Microscopios

Microscopios ópticos con contraste de fases, campo claro y campo oscuro con objetivos de 10, 20, 40 y 100 aumentos

Microscopios invertidos con contraste de fases (objetivos de 4, 10, 20 y 40x)

Microscopios  invertidos “NIKON” Mod. Diaphot-TMD y “NIKON” mod. Eclipse TE 2000U, equipados con contraste de fases, objetivos de 4, 10, 20 y 40 aumentos, con equipo de fotografía digital y conexión para cámara de cine o video. Estos microscopios tienen la posibilidad de conexión de diversos accesorios para realizar fluorescencia, micromanipulación, incubación, microcinematografía y microfotometría, DIC, Nomarski, etc.                                          Ambos microscopios disponen de epifluorescencia con  un conjunto de filtros para ultravioleta, verde y azul. (ver filtros disponibles).

Microscopio “NIKON” mod. Eclipse LV100-DU.  Epiiluminación, luz polarizada y Nomarski. Acoplado a un sistema de FOTOGRAFÍA DIGITAL

EL MODELO ECLIPSE TE-2000U SE ENCUENTRA ACOPLADO A UN
SISTEMA DE VIDEOFILMACIÓN Y FOTOGRAFÍA DIGITAL

Microscopio quirúrgico “WILD” mod. M650, compuesto por un estativo de mesa, portaóptica con cambiador de aumentos 6x, 10x, 16x, 25x y 40x, tubo binocular con ángulo de observación variable, oculares granangulares, sistema de iluminación halógeno, filtros azul y calorífugo incorporados. Está equipado con divisor de rayos y fototubo y posibilidad de suplemento para cámara de cine y video.

Microscopio estereoscópico con sistema zoom marca “NIKON” mod. SMZ-U. (75 aumentos)

Microscopio-analizador celular (JuLiTM Smart Fluorescent Cell Analyzer)Este pequeño microscopio puede utilizarse directamente en el incubador o en la cabina de seguridad biológica y ofrece la posibilidad de obtener imágenes de las células en tiempo real (en contraste de fases, fluorescencia y combinación de ambas). Entre sus aplicaciones se encuentran estudios de captura de imágenes de células vivas (video o fotos time lapse), migración celular, proliferación, control de calidad de cultivos celulares, etc.

Este equipamiento se completa con

  • Fuente de iluminación de luz fría.
  • Sistema de videofilmación. Se encuentra acoplado a un microscopio y permite la visualización en el monitor de las preparaciones depositadas en la platina. Estas imágenes pueden ser grabadas en cintas de vídeo para su posterior reproducción como material didáctico o bien para realizar estudios con técnicas de análisis de imagen.

Incubadores

Incubadores de CO2

Otros incubadores

  • – Incubador “Selecta”. Con regulación de temperatura entre 3ºC sobre Tª ambiente y 60 ºC.

El equipamiento de los incubadores se completa con:

  • Unidad intercambiadora de gas, que asegura el suministro de gases a los incubadores, realizando un cambio automático de las botellas de CO2 cuando una de ellas se agota.
  • Un medidor de CO2. Con él se controla el funcionamiento de los incubadores midiendo el porcentaje de CO2 en la cámara interior.

Cámaras para el crecimiento de  plantas

Cámara visitable de crecimiento de plantas “ASL Snijders”.

Cámara de crecimiento de plantas “ASL Snijders” mod. S 1200 V.L.

Cámara para el cultivo de plantas “KOXKA” mod. EC-1200F.

Salas climatizadas para el crecimiento “in vitro” de plantas.

Centrífugas

Centrífuga de alta velocidad marca “Beckman”. Mod. Avanti J 30 I .

30.000 r.p.m., 110.500 xg de fuerza centrífuga máxima. Rango de Tª de trabajo de –20 a 40 ºC. Tiempo de centrifugación máximo de 99 hora y 59 minutos, con una posición de parada manual para tiempos más largos . Trece rampas de aceleración y desaceleración. Equipada con:

  • Rotor de ángulo fijo de titanio mod. JA-30.50 Ti.
  • Velocidad máxima de 30.000 r.p.m. y fuerza centrífuga máxima de 108.860 xg, para tubos de 50 ml. Con una capacidad total del rotor de 400 ml.
  • Rotor basculante tipo JS-24.15. Velocidad máxima de 24.000 r.p.m. (103.900 xg). Para 6 tubos de 15ml.
  • Rotor de ángulo fijo tipo JA-10. Velocidad máxima de 110.000 r.p.m. (17.700 xg). Capacidad máxima de 3 l. en 6 botellas de 500 ml.
  • Rotor de elutriación JE-6B. (cámaras de elutriación de 5ml y de Sanderson). Permite la separación de células o componentes celulares mediante elutriación.

Centrífugas refrigeradas marca “HERAEUS” mod. MINIFUGE T, y MULTIFUGE 1L-R

  • rango de tiempo programable de 0 a 99 horas
  • rango de temperatura: -10 a 36ºC
  • RCF max. 6200 xg (9 niveles de aceleración y 10 de frenado)
  • adaptadores para para placas de microtitulación y tubos de 5, 12 y 50 ml.

Centrífuga refrigerada marca “HERAEUS” mod. Megafuge 1.0R. Equipada con:

  • citorrotor, con el que se convierte en una citocentrífuga, permitiendo realizar extensiones en portaobjetos a partir de suspensiones celulares (RCF max. 3220 xg).
  • microrrotor, con el que se convierte en una microcentrífuga que permite centrifugar hasta 24 tubos tipo Eppendorf hasta 15.000 r.p.m.(RCF max. 20120 xg). Posee reductores para tubos de 1 y 0,5 ml. rotor basculante con adaptadores cerrados y esterilizables en autoclave (RCF max. 3020 xg).

Centrifuga para tubos Eppendorf marca “Beckman” mod. Microfuge R.

Velocidad máxima de 15.000 r.p.m. (20.937 xg). Rango de Temperatura de –20 a 40 ºC.

Crioconservación

Los congeladores disponen de un sistema de aviso por alarma telefónica en caso de variación de la temperatura por encima del límite establecido.

Crioconservadores (Depósitos de nitrógeno líquido):

  • para el almacenamiento de muestras en nitrógeno líquido de 21, 40, 60 y 80 litros de capacidad.
  • para el transporte de muestras. (2 y 20 litros), a disposición de los usuarios que lo soliciten.

Sistema de transferencia de nitrógeno líquido

Congeladores de –85ºC “Sanyo”

Congelador –40ºC SANYO

Fabricador de hielo en escamas “HOSHIZAQUI” mod. F-120B

Nieve carbónica (Sistema de producción en pastillas).  

Citometría de flujo y separación celular

La citometría de flujo permite permite realizar medidas rápidas en partículas suspensión (células, núcleos, cromosomas…) que fluyen hacia un punto donde se realizan la medida simultánea de diversos parámetros ópticos (dispersión frontal y lateral de la luz y fluorescencia de diferentes longitudes de onda). Algunos equipos permiten además separar físicamente células o partículas identificadas durante el análisis y recuperar en tubos separados subpoblaciones homogéneas que presentan una propiedad específica a partir de una población compuesta por distintos tipos celulares. Se pueden cuantificar las señales correspondientes a la absorción, y la emisión de fluorescencia (propia o adquirida por fluorocromos). Los datos obtenidos son almacenados y analizados con la ayuda de un ordenador y una serie de programas informáticos especialmente diseñados para ello.

Aplicaciones

Sus aplicaciones son muy amplias ya que se estiman directamente diversos parámetros celulares. Además de medir la absorción y dispersión de la luz a diferentes ángulos que permiten aplicaciones particulares (tamaño, complejidad o granularidad) se pueden realizar otras medidas basadas en sondas químicas (fluorocromos) o inmunológicas (anticuerpos monoclonales) acoplados directa o indirectamente a fluorocromos para poner de manifiesto macromolélulas celulares. Se aplica al estudio cualitativo y cuantitativo de constituyentes celulares (ARN, proteínas, cromosomas, mitocondrias, enzimas, receptores…). Se pueden realizar medidas de actividad enzimática, flujo de calcio, potencial de membrana o pH, viabilidad, citotoxicidad, efectos de drogas o antimicrobianos, permitiendo medir propiedades de cientos de células individualmente, en lugar de establecer una media sobre una población completa. El contenido de ADN es uno de los parámetros más analizados. Se trata de un marcador de la ploidia y de la situación de las células en las diferentes fases del ciclo celular, permitiendo asimismo el cálculo del índice de ADN.

La Sección de Cultivo de Tejidos cuenta con un citómetro de flujo con capacidad para separar físicamente diferentes tipos celulares (Cell Sorter) y tres analizadores, cuyas características son las siguientes:

Cell Sorter (SONY SH800Z):  Equipo Financiado por la Fundación Cultural Privada Esteban Romero en 2015. Citómetro separador con cuatro láseres con emisión a 405 (violeta), 488nm (azul) ,  561 (amarillo- verde),  y 638 nm (rojo). Módulo de separación a alta velocidad (25.000 e/s). Seis  detectores para fluorescencia asignables a cualquiera de los láseres. Sistema de refrigeración en la toma y recogida de muestra . Dos vías de separación y módulo de separación en placa (célula única). Sistema Index sorting y Nozzel de 70, 100 y 130 um. Formato de datos Flow Cytometry Standard (FCS) 3.0 or 3.1 Incluye cabina de seguridad biológica. Ubicado en el edificio LAIB

Analizadores:

 Citómetro de flujo Becton-DiCkinson mod. FacsCalibur (2 láseres/4 colores)

Citómetro de flujo analizador de células de 6 parámetros, automatizado, que permite el análisis con 4 colores de fluorescencia.

– OPTICA DE EXCITACIÓN:  

– Láser 1 de Ión-Argón, de 15 miliwatios, emisión fijada a 488 nm y  refrigeración por aire atmosférico (laser azul).

– Laser 2: para trabajar con 4ºcolor, Laser diodo rojo de emisión fijada a 635 nm, que permite trabajar con diversos colorantes o fluorocrómos que se excitan en rojo, incluyendo un 4º parámetro de fluorescencia FL4.

– Detector de Dispersión Directa (registro de señales Forward Scatter)

– Detector de Dispersión en Ángulo de 90 grados (registro de señales Side Scatter)

– Fotomultiplicadores con filtros de paso de banda que permiten trabajar sin necesidad de cambiar de lentes, con Fluoresceína, Ficoeritrina, Ioduro de Propidio, Naranja de Acridina, Naranja de Tiazol, 7-Amino Actinomicina D Complejo Ficoeritrina, Rojo Texas, DioC5 y FLUO-3, entre otros fluorocrómos y un cuarto color de fluorescencia , mayor de 650nm.

Citómetro de flujo Coulter mod. Epics XL 

Ambos poseen características similares. Láser de argon de 15 mW a 488 nm y detectores para fluorescencia a longitudes de onda aproximadas de 525, 575, 620 y 675 nm.

Citómetro de flujo Marca Coulter mod. FC 500.

Equipo financiado con fondos FEDER 2002-2004 con destino a la Sección de Investigación Biomédica (SEIB) del futuro Campus de Ciencias de la Salud y que se encuentra instalado provisionalmente en el laboratorio de citometría de la Sección de Cultivo de Tejidos del SACE. Sus principales características son: Láseres de Argon de 20 mW a 488 nm y Helio-Neon de 20 mW a 633 nm. Detectores para fluorescencia a longitudes de onda de 525, 575, 610, 675 y 755 nm. Ubicado en el edificio LAIB

Analizador de ploidia (PARTEC PA I).

Aunque se trata de un citómetro de flujo especialmente diseñado para la determinación de ploidias en plantas, proporciona un recuento, análisis de ploidia y ciclo celular en células animales y vegetales mediante la iluminación de la muestra con lámpara de mercurio. Conjunto de filtros para la excitación en UV y emisión en azul. El análisis de ploidia que efectúa este equipo está basado en una tinción con DAPI, aunque es posible utilizar otros colorantes y modificar la configuración de filtros del equipo.

Lectores de placas

Fluostar Omega. Medidas de absorbancia (espectro), fluorescencia y luminiscencia.

Fluostar Galaxy. Medidas de absorbancia (mediante filtros), fluorescencia y luminiscencia.

Titertek Multiscan mod. MCC/340. Medidas de absorbancia (mediante filtros)

Filtros disponibles para los lectores de placas

Otros equipos

Luxómetro “Nieuwkoop mod. LU-345”

Medidor de la intensidad de luz en escala de 0 a 200.000 lux.

Fotorradiómetro

Para la detección de iluminancia, radiancia, luminancia y temperatura. Realiza medidas de iluminancia en lux y foot-candle, de irradiancia en W/m2, en W/cm2 y en mol/m2s, de luminancia en cd/m2 y de temperatura en ºC ó F. Programa de muestreo entre 1 segundo y 12 horas, permitiendo memorizar hasta 30.000 lecturas. Los datos se almacenan en memoria y más tarde se pueden trasladar a un ordenador o impresora.

Osmómetro “Wescor mod. Vapro”

Determina la osmolaridad de la muestra a temperatura ambiente por presión de vapor. portamuestras para medir volúmenes de 2 y 10 microlitros.

Contador, analizador de tamaño de células y partículas (Coulter Z2).

Sistema para el recuento y distribución por tamaño de células y partículas en suspensión. Rango de medida entre 1 y 120 micras. Volumen de medida inferior a 1 ml. Resultados en forma de contaje total o concentración. Proporciona una distribución de la población por tamaño en gráficos o tablas, incluyendo funciones estadísticas.

Electroporador (Biorad, mod Gene pulser Xcell).

Sistema de electroporación para bacterias y células eucarióticas, incluyendo células de mamíferos y protoplastos de plantas. Generación de pulso eléctrico de caída exponencial y/o onda cuadrada.

Sistema para medir resistencia eléctrica a través de membranas (Millicell ERS-2)

Sistema de fotografía digital

Permite la realización y procesamiento de fotografías digitales, así como la observación en tiempo real de la muestra colocada en la platina del microscopio desde cualquier ordenador conectado a la red de la UMU. También dispone de funciones adicionales como medición de distancias, calibración y otras.

Irradiador UV (Crosslinker). Tubos UV de 312 nm .  Para otras aplicaciones también se encuentan disponibles  tubos UV  de 254nm.

Sonicador LabsonicL.

Potencia y tiempo regulables. Sondas de titanio de 4 y 19 mm (200w). Cabina de insonorización.

Baño con agitación marca “Memert”

Aparataje Básico

  • Sistema de producción de agua ultrapura y apirógena, Millipore mod. MilliQ-Biocel
  • Autoclaves, estufa de esterilización, sistemas de filtración, agitadores rotatorios (para placas, matraces, etc. de r.p.m. regulable y programable), bombas peristálticas y de vacío-presión, pHmetros, balanzas de precisión, etc.
  • pHmetro Crison: dispone de un microelectrodo de 3 mm de diametro y 5 mm de inmersión mínima.